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川芎提取物的分离及灌注损伤的药理作用

导读:采用大孔树脂方法分离的 10 种川芎组分对大鼠心肌缺血/再灌注损伤(myocardial ischemia/reperfusioninjury,I/R)后血栓形成、血小板功能和血管内皮因子的药理作用。


返回列表 来源:未知 发布日期:2019-10-23 17:52【

目前,川芎多以水提取和乙醇提取,后期采 用乙醇回流提取减压浓缩,通过大孔吸附树脂柱, 这样川芎的有效成分含量较高,前期课题组对川 芎的化学成分和配伍进行了系统研究,现有文献 报道川芎有效成分的药理研究主要集中在阿魏 酸、藁本内酯和川芎生物碱方面。北京北分瑞利采用大 孔树脂分离提取 10 种不同的川芎组分,比较其对 大鼠心肌缺血/再灌注损伤(myocardial ischemia/ reperfusion injury,I/R)模型血小板功能和血管内皮 因子的药理作用,对川芎整体提取物进行分离和 药理学评价,以期建立符合川芎中主要化学物质 的提取方法和成分测定的方法,并客观评价其药 理作用和药物特征。

材料

药物的制备 川芎药材由河北省深州市北京神农饮片厂提 供,原产地为四川都江堰地区,川芎(Ligusticum chuanxiong Hort)药材由中国中医科学院中药研究 所郝近大研究员鉴定为道地药材,符合中国药典 2015 年版一部的相关规定。饮片采用 10 倍量水煎 煮提取 2 次,每次 2 h,水煎浓缩;然后醇沉,第 1 次醇沉浓度为 60%,4 ℃冷藏 24 h,浓缩;第 2 次醇沉浓度为 80%,4 ℃冷藏 48 h,浓缩得到样 品。然后进行溶剂分离,得到正丁醇组分和乙醇 组分,再进行大孔树脂分离得到样品,以 上样品由北分瑞丽分析仪器有限公司研究所提供。

仪器

北分瑞利高效液相色谱仪; TBE-300 半制备型高速逆流色谱仪(上海同田生化 技术有限公司 ) ; Milli-Q 高纯水系统 ( 美 国 Millipore);美国 Waters Spherisorb ODSl 色谱柱 (250 mm×2.0 mm,5 μm);SC-3 型电动呼吸机(上 海医疗设备厂);ECG-6511 型心电图机(上海光电 仪器有限公司);RX-2000 型全自动生化仪(美国 Technicon 公司);XSN-RⅡ型体外血栓测定仪(江 苏省无锡电子仪器二厂);KHLBY-NJ2 型血小板聚 集仪(北京普利生公司);SN-682 型放射免疫 r 计数 仪(上海核辐射仪器有限公司)。

方法

川芎提取物的溶剂分配 采用 10 倍量水煎煮提取川芎饮片 2 次,每次 2 h,浓缩喷雾干燥,得到川芎提取干粉。准确称 取定量药材提取干粉,先加入 4 倍量纯净水搅拌 溶解,再加入定量的 95%乙醇至乙醇浓度为 60%, 然后静置醇沉。将溶液用管式离心机离心过滤, 所得固体即为溶剂分配水溶性准组分。将所得液 体浓缩至无乙醇,分别用等量乙酸乙酯和正丁醇 溶剂萃取,将萃取液分别浓缩干燥,得到乙酸乙 酯和正丁醇组分。

标本采集及测定方法 120 min 后腹主动脉取血,Chandler 体外血栓 形成测定参考文献[6]方法加以改进,测定给药各 组大鼠的体外血栓长度、湿重和干重。腹主动脉 取血 1.6 mL,立刻注入长 25 cm、直径 2 mm 的硅 胶管中,将硅胶管环绕封口置于体外血栓形成仪 中,匀速旋转 15 min,之后将形成的血栓用滤纸 吸干表面液体,测量其长度,血栓湿重,然后在 烘干机中 37 ℃加热 20 min 后取出,称血栓干重。

结果

分离的 10 种川芎(组分)提取物色谱图 大孔树脂分离正丁醇组分(00112)和乙醇组分 (00113) 得到组分 0011211- ① 、 0011212- ② 、 0011213-③、0011214-④、0011311-⑤、0011312- ⑥、 0011313-⑦、0011314-⑧。其中①、②、③、⑤、 ⑥、⑦组分进行了色谱分离,色谱图见图 2。④和 ⑧组分中强极性化合物太多,现有分析手段不能 很好的进行分离,故没有进行分析。

讨论 利用现代科学技术揭示中药复方配伍理论的 科学内涵,并以方剂组分临床疗效确切的中药为 主要研究对象,是开发新型现代化中药的根本途 径。从单味中药入手,建立标准化、资源化和国 际化的研究模式是现代中药的总体目标。近年 来,随着色谱仪器及联用技术的快速发展,尤其 是液相色谱-质谱联用技术结合了色谱的分离和质 谱的定性优势,加上紫外与质谱双检测模式的应 用,使得复杂未知药品的分析和定性变成可能, 当然,对于色谱重叠峰的技术处理依然是目前中 药色谱研究和实际应用的难点,建立中药色谱指
中药的化学成分是方剂发挥疗效的根本和物 质基础,通常(传统)以水提取法为介质,但在水煎 剂的情况下,药物饮片产生新的化学活性成分的 可能性是比较(少)小的,方药的化学成分不都是代 表其体内发挥生物效应的化学形式,对中药饮片 的化学物质基础和药效之间的内在关系进行关联 分析,阐明方药化学成分及科学内涵是研究中药 的重要手段。

综合几项药效学指标的实验数据表明,经过 水提取和乙醇提取的川芎组分作用较好,优于水 提取后的正丁醇组分。传统中药的应用,川芎单 味药和其复方在制剂中的主要入药方式为原生药 粉碎入药或水煎剂,后来发展为水提取和醇提取。 但水提取得到的有效成分(组分)较少,川芎的主要 化学成分为挥发油类脂溶性成分、不溶性生物碱 成分等脂溶性成分,因此采用醇提取方法得到的 有效成分含量较高,药效学研究也显示川芎提取 物的药理作用,因此采用水提取和醇提取相结合 的方法能够保存川芎较好的药理活性。