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离子色谱柱后补液-积分脉冲安培法检测阿立哌唑

导读:采用离子色谱柱后补液-积分脉冲安培法建立了测定阿立哌唑原料药中三乙胺残留量的新方法。色谱柱为 Dionex IonPac CS17 (4mm×250 mm),保护柱为 Dionex IonPac CG17(4mm×50 mm)。对淋洗液的浓


返回列表 来源:未知 发布日期:2019-10-22 14:22【
阿立哌唑(aripiprazole)是日本 Otsuka 公司开发的新型非典型抗精神病药,临床主治 各种急、慢性精神分裂症和情感障碍。阿立哌唑的合成路线较多,由于三乙胺具有助 溶和轻度的防腐作用,在合成过程中会被用到,产品中有可能会残留微量的基因毒性杂质三 乙胺,因此对三乙胺残留量的监测是阿立哌唑药物质量控制过程中必不可少的一部分。目前 三乙胺已收载于人用药品注册技术要求国际协调会(ICH),Q3C(R6)中,规定其限度 为 500 mg/kg,欧洲药品质量管理局(EDQM)也规定其残留限度为 320 mg/kg。
三乙胺通常采用气相色谱法和溴酚蓝分光光度法进行测定,还有采用离子色谱检 测乙醇胺、二甲胺等胺类,但用离子色谱测定三乙胺很少见。北分瑞利等采用 Dionex IonPac CS17 色谱柱,MSA 6mmol/L 等度淋洗,采用 CSR 循环再生电抑制模式测定草甘膦 合成工艺中的三乙胺。上述方法中检出限最低的为气相色谱法,可达约 48 mg/kg。但阿立 哌唑中残留的三乙胺含量很低,采用上述方法灵敏度不够,且阿立哌唑中主体干扰较大,无 法满足要求。北分瑞利用柱后衍生离子色谱-脉冲安培法来测定盐酸羟胺,采用 Dionex IonPac CS16 (4mm×250 mm)色谱柱,流动相是 30 mmol/L 甲磺酸溶液,流速为 1.0 mL/min; 衍生剂为 500 mmol/L 氢氧化钠,流速为 0.3 mL/min,该方法检出限为 0.012 mg/L,定量限 为 0.037 mg/L。本文借鉴该方法来测定三乙胺的含量,并对淋洗液浓度及流速、柱后补液的 浓度及流速、电位波形进行优化,通过考察其线性关系、精密度、稳定性来验证方法的可行性。

实验部分
1.1 仪器与试剂
 北分瑞利SP-1000 型离子色谱仪,包括单元四元梯度泵,AS-AP 自动进样器,DC 模块 含安培检测器,Chromeleon 6.80 色谱工作站(美国赛默飞公司);色谱柱为 Dionex IonPac CS17 (4mm×250 mm),保护柱为 Dionex IonPac CG17(4mm×50 mm)(美国戴安公司)。 三乙胺(99.5%, 盘锦研峰科技有限公司);甲烷磺酸(99.5%);50% NaOH(w/w, 分 析纯); OnGuardTM RP 柱(1 cc, 美国赛默飞公司);阿立哌唑供试品(1 #,2 #,3 # , 某药 厂提供)。

1.2 溶液的配制
1.2.1 三乙胺标准溶液的配制 精确称取 66.1 mg 三乙胺标准品于 50 mL 容量瓶中,用 30 mmol/L MSA 淋洗液溶解定 容,配制得到 1315 mg/L 标准储备液,稀释得到 26.30 mg/L 的标准溶液。再逐级用淋洗液 稀释得到浓度分别为 1.315、0.6575、0.4383、0.2630、0.1315 mg/L 的三乙胺系列储备液。 1.2.2 甲烷磺酸淋洗液溶液的配制 称取 19.28 g 甲烷磺酸于 2.0 L PP 淋洗液瓶中,加超纯水到 2000 mL,摇匀,所得溶液 的浓度约为 100 mmol/L。
1.2.3 NaOH 溶液的配制 称取 81.09 g 50%NaOH(w/w)于 2.0 L PP 淋洗液瓶中,加超纯水到 2000 mL,摇匀, 所得溶液的浓度约为 500 mmol/L。
1.2.4 实际样品溶液的配制 称取 50.1 mg 阿立哌唑供试品于 25 mL 容量瓶中,准确加入 10 mL 乙腈,置于 50℃水 浴中溶解,摇匀,随后准确加入 10 mL 超纯水,置于冰箱中冷藏 60 分钟后取出,阿立哌唑 会以沉淀形式析出。静置后离心,取上清液用经活化的 RP 柱(活化方式:先用 5 mL 甲醇 对 RP 柱进行冲洗,放置 30 min 后,用 10 mL 超纯水进行冲洗,备用)进行过滤,先丢弃 最初的 3 mL,取滤液即得浓度约为 2500 mg/L 的供试品溶液。
1.3 色谱条件 淋洗液:A 超纯水(70%),B 100 mmol/L 甲烷磺酸(30%),流速为 1.0 mL/min,等度 淋洗;柱后补液:500 mmol/L NaOH 溶液,流速为 0.2 mL/min;波形:氨基酸电位;进样 量:25 μL;柱后衍生管:375μL。

2 结果与讨论
2.1 色谱条件的确定

2.1.1 淋洗液浓度的选择 实验选取 20、25、30 mmol/L 的甲烷磺酸溶液作为淋洗液分别测定 1.315 mg/L 的三乙 胺标样,检测结果显示其保留时间分别为 3.567、3.189、2.953 min,峰高分别为 47.31 nC、 103.7 nC、119.8 nC。表明 30 mmol/L 的淋洗液灵敏度最高,且保留时间适宜。若使用更高 浓度的甲烷磺酸溶液作为淋洗液,则三乙胺的保留时间会更短,但可能存在与其他快出峰杂 质分离度变差,影响定量。因此选取 30 mmol/L 的甲烷磺酸溶液作为实验的淋洗液。
2.1.2 检测电位的选择 伯胺的有机化合物,在碱性条件下,用金电极采用糖电位和氨基酸电位都有较高的响应。 糖电位为脉冲安培检测,氨基酸电位为积分安培检测,脉冲安培检测在一个脉冲周期中对电 流积分所施加的电位是单一的,它存在一个短暂的间歇以使充电电流衰减,而积分安培对工 作电极施加的是一种对应时间波形的循环电位,即电极先被氧化然后再被还原为其原始状态。 因此,在 CS17 柱分离后,用 NaOH 补液调节 pH 到碱性。选取糖电位和氨基酸电位这两种 波形分别测定 1.315 mg/L 的三乙胺标样,结果如图 1。从图 1 可以看出,二者的噪音差别不 大,且氨基酸电位波形的响应值高,因此选取氨基酸电位波形作为实验的波形。

结论
采用离子色谱柱后补液-安培法,在 30 mmol/L 的甲烷磺酸溶液淋洗液,流速为 1.0 mL/min,柱后补碱为 500 mmol/L 的 NaOH 溶液,流速为 0.2 mL/min,氨基酸电位波形的色 谱条件下,准确地分析阿立哌唑中基因毒性杂质三乙胺的残留量,最低检出限为 18.2 mg/kg, 灵敏度高,满足药典的要求。该方法准确度、精密度和稳定性较好,在阿立哌唑的质量控制 中有重大意义。